Hereditaire sferocytose Diagnostiek: Algemeen Eosine-5’-maleimide test Studies UZ Gent Screeningsregel Sysmex XE5000 EMA test: Resultaten ROC analyse voor bepaling van de optimale cut-off Stabiliteit van stalen Huidige situatie Voor het eerst beschreven in 1871; ook ziekte van Minkowski-Chauffard genoemd Frequentste oorzaak van erfelijke chronische hemolyse in Noord-Europa en Noord-Amerika: 1/2000 tot 1/5000 Ook in andere etnische groepen, slechts uitzonderlijk in de zwarte populatie Meestal autosomaal dominant, soms recessief en de novo spontane mutaties. 75% heeft positieve familiehistoriek: klinische expressie meestal uniform in 1 familie, maar sterk verschillende ernst tussen verschillende families Hereditaire sferocytose Deficiëntie/dysfunctie van een component van het cytoskelet van de RBC: a/b-spectrine Ankyrine Proteïne 3 of band 3 (anion transport proteïne) Proteïne 4.2 (pallidine) Oorzaken hereditaire sferocytose Oorzaken hereditaire sferocytose 70-90% van de fluorescentie van EMA Oorzaken hereditaire sferocytose Combinatie van: Klinische presentatie (asymptomatisch tot fulminant hemolytische anemie en levensbedreigende aplasie) Familiale historiek Fysische examinatie (splenomegalie, geelzucht en galstenen) Laboresultaten: Volledig bloedbeeld RBC morfologie en indexen DAT (negatief) Tekenen van hemolyse: gestegen bilirubine, gestegen reticulocyten, gestegen LDH, gedaalde haptoglobine Screenings- en/of confirmatie test Diagnostiek 10f2 Studie UZ Gent: screeningsregel Sysmex XE5000 Patiënten met HS: n = 45 Controle populatie: n = 1492 Se = 100%, Sp = 99.3%, PPV = 75.0%, NPV = 100% Studie UZ Gent: screeningsregel Sysmex XE5000 Periode: juli tem december 2010 Patiënten met HS: n = 25 Controle populatie: n = 2568 Screeningstesten: Osmotische fragiliteit (OF) Parpart et al, 1947 Zure glycerol lysis test (AGLT) Gottfried en Robertson, 1974 & Zanella et al, 1980 Osmotische gradient ektacytometrie Clark et al, 1983 Autohemolyse test Dacie en Lewis, 1984 Hypertone cryohemolyse test Streichman en Gescheidt, 1998 Eosine-5’-maleimide binding test King et al, 2000 Diagnostiek 152_Normal_RBC_Osmotic_Fragility_Illust_1 Principe: Flowcytometrische test die de fluorescentie intensiteit van intacte RBC gelabeld met EMA meet (kleurstofbindingstest). EMA reageert covalent met Lys-430 in de 1ste extracellulaire loop van band 3 proteïne. Interpretatie: Bij HS is er een gedaalde mean channel fluorescence (MCF). Vals positief: Zuidoost Aziatische Ovalocytose, CDA type II, stomatocytische variant cryohydrocytose. Mean channel fluorescentie (MCF) Diagnostiek: EMA test Protocol: King et al, British Journal of Haematology, 2000; 111: 924-933 1 uur incuberen Diagnostiek: EMA test image preview http://www.djblabcare.co.uk/djb/data/image/14/0/Hettich_EBA20_Portable_Centrifuge.jpeg Bekijk de afbeelding op ware grootte http://school.discoveryeducation.com/clipart/images/clock.gif Bekijk de afbeelding op ware grootte http://www.djblabcare.co.uk/djb /data/image/14/0/Hettich_EBA20_Portable_Centrifuge.jpeg Bekijk de afbeelding op ware grootte VACUUM BLOOD COLLECTION TUBE (EDTA tube) Voordelen: Sensitiviteit (92.7 - 100%) en specificiteit (99.1 – 99.6%). Klein volume nodig (10 µl bloed). Snel (3 uren). Kan gemengde populaties RBC detecteren. Nadelen: EMA: lichtgevoelig en hydrolyseert in waterig milieu (bewaring bij -20°C voor max. 4 maand). Vals negatieve resultaten voor geïsoleerde ankyrine deficiëntie?? Test moet uitgevoerd worden binnen 24 uur na bloedafname?? King et al, British Journal of Haematology, 2000; 111: 924-933 Diagnostiek: EMA test Nood aan standaardisatie resultaten: Verschillende cut-offs in de literatuur: King et al, 2000: 45.5 MCF units Stoya et al, 2006: 4000 MCF units Tachavanich, 2009: 91.5 MCF units Hangt af van: Flowcytometer Incubatietijd EMA batch  Resultaten worden uitgedrukt als RATIO: Bij elke run 3 of 6 controles Ratio = MCF staal / gemiddelde van de MCF van de controles Vereiste: alle controles binnen referentie-interval (ratio: 0.9 – 1.1) Studie UZ Gent: resultaten EMA test Studie UZ Gent: Resultaten EMA test Zeer hemolytisch staal Einddiagnose: geen HS n = 154 n = 27 n = 10 n = 17 n = 24 n = 17 Cut-off = 0.80: Sensitiviteit = 96% en Specificiteit = 99.6 of 100% Cut-off = 0.80: Sensitiviteit = 96% en Specificiteit = 99.6 of 100% verlaagd. Sterk suggestief voor hereditaire sferocytose. 0.81-0.89 Twijfelachtig resultaat. Graag controlestaal voor 2e bepaling. >= 0.90 Normaal. Niet suggestief voor hereditaire sferocytose. Literatuur: Staalbewaring bij 4-8°C en uitvoering test binnen 24u na bloedafname. Niet haalbaar in routine: Nazicht stabiliteit van bloedstalen bij bewaring op kamertemperatuur en bij 4-8°C voor 7 dagen. Studie UZ Gent: Stabiliteit van stalen voor EMA test Screeningsregel Sysmex XE5000: 14/1/2011 tem 14/2/2012: 145 flaggings bij 101 patiënten 7 nieuwe HS patiënten, 21 gekende HS patiënten, 60 andere patiënten en 13 patiënten met te weinig klinische info PPV = 28% EMA test: 15/12/2010 tem 14/2/2012: 52 aanvragen bij 45 patiënten 24 interne patiënten en 21 externe patiënten 11 (16) patiënten met positief resultaat, 1 (3) patiënt(en) in grenszone en 12 (26) patiënten met negatief resultaat UZ Gent: Huidige situatie 6 nieuwe HS patiënten, 3 gekende HS patiënten, 2 twijfelgevallen Met dank aan: Jan Philippé, UZ Gent Carolien Bonroy, UZ Gent Veronique Stove, UZ Gent Veerle Mondelaers, UZ Gent Anna Vantilborgh, UZ Gent Jan Dierick, AZ Maria Middelares Gent Johan Billiet, AZ St-Jan Brugge Els Moreau, Heilig Hart Roeselare http://image.made-in-china.com/2f0j00uvBEqPIcOLkQ/EDTA-Blood-Collection-Tube-FH-3022-.jpg EDTA